国家肉羊产业技术体系 - 波尔山羊胚胎移植

波尔山羊胚胎移植

编辑： zuopei 2011-07-16

旨在探讨育成波尔母羊提供胚胎的质量、数量和年龄，摘要：通过选取育成波尔山羊进行胚胎移植。供受体发情同步差，移植胚胎数等对胚胎移植胜利率的影响因素分析，进一步开拓胚胎移植的技术应用研究。

波尔山羊（Boer Goat）是目前世界上最优秀的肉用山羊品种之一，以其体型大、增重快、产肉多、耐粗饲而著称于世，有“肉羊之父”之美称。自1995年引进国内以来很快得到推广应用，深受饲养者和消费者欢迎。近10年来在国内波尔山羊的胚胎移植也得到了迅速的发展，其移植程序是将波尔山羊的胚胎移植到本地白山羊或奶山羊体内。但绝大多数研究的都是成年波尔山羊，关于首次妊娠前的波尔山羊（育成羊）胚胎移植的研究很少。为此，本实验选取了11只8-10月龄、有发情表现的育成波尔山羊进行胚胎移植，目的旨在探讨通过波尔育成母羊的供体胚胎的质量、数量和年龄，供受体发情同步差，供受体药物安排、移植胚胎数等影响因素来开展育成波尔山羊胚胎移植的技术应用研究。

　　1进行本实验的理论和技术基础

　　胚胎移植技术的实施是一项严密的系统工程，它的成功首先依赖于一套完善、成熟的技术体系，其中包括以下技术环节：供受体的选择、同期发情、超数排卵、人工授精、胚胎采集、胚胎质量鉴定、胚胎移植、饲养管理、妊娠诊断等。

　　1.1育成波尔山羊育成羊是指断奶到第一次配种的公母羊，即5～18个月龄的羊。

　　1.2同期发情同期发情又称同步发情，就是利用某些外源激素制剂人为的控制并调整一群母畜发情周期的进程，促使群体母畜卵巢的生理机能处于相同阶段，使之在预定时间内集中发情。

　　1.3超数排卵在哺乳动物的卵巢里含有大量的卵泡，约为2×105～4×105个，但在其有限的生命过程中仅排出数百枚卵子，大部分在发育的不同阶段闭锁退化，应用超数排卵（Multi-ovulation, Mo）技术则可使山羊每次排卵由1～3个增加到10～20个，并且这些胚胎都能受精，形成卵裂期胚胎，移植到受体母畜，最终发育成个体。

　　1.4人工授精以鲜精授精为主，要求精液活力在70%以上，每次输精有效精子数不少于30×106，输精次数不少于3次，确认发情时立即进行第1次输精，山羊最好间隔6h输精1次，超排后的供体第2次配种尤为重要。

　　1.5胚胎采集目前普遍采用的羊外科手术方法对供体羊进行冲卵，有可能会引起子宫、卵巢及周围组织发生粘连，但是，目前羊非手术采集胚胎技术还不够成熟，还没有一套成规的方法，采胚管没有定型，采胚率不高。

　　2现场实验

　　选取了11只8-10月龄、有发情表现的育成波尔山羊，按照方案设计，对收集数据进行效果分析，目的是开发一套适用于育成波尔山羊有效的超数排卵方案和胚胎移植技术体系，为波尔山羊胚胎移植产业化提供理论和技术参考。

　　2.1材料与方案

　　2.1.1材料FSH-P（垂体促滤泡素）、LH-P（垂体促黄体生成素）、PG（氯前列烯醇）、速眠新、苏醒灵3号、PBS冲卵液（杜氏磷酸缓冲液）、M 16胚胎培养液。

　　供体羊: 纯种波尔山羊，产自南非。

　　受体羊：长江三角洲白山羊，来自徐州地区。

　　2.1.2饲养条件和羊群管理供（受）体羊实行圈养，饲养密度为8m2/只供体羊，6m2/只受体羊，均保持饲养环境稳定，饲养环境卫生、干燥、棚舍温度适宜，避免应激反应。制定合理的日粮配方，满足清洁饮水的需要，每天放牧2h以上，保证正常的营养平衡。

　　2.1.3超数排卵和同步发情方案

　　注：①剂量为90 IU的FSH，剂量每天递减5 IU，第25天上、下午各20IU，第26天上、下午各15 IU，第27天上、下午各10 IU。②第28天，供体羊发情，第１次配种时加注LH，LH剂量比FSH总量少10 IU，配种以人工输精为主，输3次为宜。

　　2.2胚胎的回收与移植

　　2.2.1手术前空腹24h，只能水。

　　2.2.2手术前一天剪毛，部位为腹中线和左右腹股沟之间，范围约20cm×20cm，同时用剃须刀剃净毛茬。

　　2.2.3麻醉及保定麻醉视体重而定，每公斤体重肌注0.09ml速眠新。将母羊侧卧或仰卧保定。

　　2.2.4用0.10%的新洁尔灭清洗手术部位，用2%～4%碘酊棉球对手术部位由里向外消毒、晾干。再用75%的酒精棉球对手术部位由里向外消毒、脱碘、晾干。

　　2.2.5手术通道在离乳房前端约2cm处，在腹中线和腹股沟的中间处纵向切开4～5cm的刀口，将皮下结缔组织分离，暴露肌膜，用手术刀将肌膜轻轻切开，暴露肌肉层，再用刀柄后端将肌肉层和腹膜钝性切开，并将卵巢、子宫引出刀口外。

　　2.2.6冲胚方法用6#～8#头皮针从子宫输卵管结合部的子宫端导入到输卵管的峡部，将喇叭口导卵管从输卵管的喇叭口输入3～4cm，导卵管远端与φ120mm表面皿相接，助手事先用10ml注射器抽取5～8ml的冲卵液与头皮针连接，把冲卵液缓缓推出，胚胎即通过母羊输卵管回收到表面皿中。另一侧输卵管操作同上。

　　2.2.7移植方法将有黄体一侧的输卵管伞部拨开，找到管口，把装有胚胎的移植器从此插入3～4cm，然后将胚胎轻轻推出即可。

　　2.2.8缝合供受体羊伤口均采用三层缝合法,即腹膜、肌肉连续缝合，皮肤结节缝合，针间距0.80～１cm，在肌肉和皮肤间撒适量青链霉素粉，以防伤口感染。

　　2.2.9每只羊用苏醒灵3号2ml静脉注射解醒，术后消炎3d。

　　2.2.10术后管理避免应激反应，妊娠受体羊产前两个月要补足充足的维生素、微量元素，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常发育，又要避免难产。

　　2.3数据统计与分析用卡方和t 检验方法对数据进行生物学处理和分析。超数排卵效果：超排羊只数、采胚数、可用胚数及采胚率。胚胎移植效果：移植受体数、移植胚胎数、妊娠数、产羔数、供体羊平均获羔羊数。同步发情与妊娠的关系：供受体同期（±12h内）和不同期（±12h外）的妊娠率比较。胚胎类型与妊娠的关系：2细胞、4细胞、8细胞移入受体羊的妊娠率。

　　3结果

　　3.1冲胚结果

　　说明：表格中（）的c表示细胞，例如：4c表示4细胞。

　　3.2移植结果

　　说明：表格中（）的数字表示移植有双胚的羊只数

　　4结果总结

　　4.1超数排卵超排供体数：11（只）；采卵总数：142（枚）；采卵平均数：12.90（枚/只）；获胚总数：121（枚）；获胚率：0.85（%）；获胚平均数：11（枚/只）；可用胚总数：98（枚）；可用胚平均数：8.90（枚/只）。

　　4.2胚胎移植效果移植胚胎数：98（枚）；移植受体数：74（只）；移植妊娠数：43（只）；产羔数：61（只）；供体羊平均获羔羊数：5.50（只）；妊娠率：58（%）。

　　4.3同期发情时间差与妊娠的关系

　　供体比受体早12h以上：35.70(5/14)：

　　供受体同期（±12h以内）：67.30(33/49)；

　　供体比受体晚12h以上：45.50(5/11)。

　　经t检验，供受体同期（±12h以内）与供体比受体晚12h以上在受体羊的妊娠率的|t|值=1.15< t0.05=1.96，差异不显著，但是供体羊比受体羊早12h以上在受体羊的妊娠率与同期相比|t|值=5.07> t0.01=2.58，与晚12h以上相比|t|值=2.97> t0.01=2.58，差异均极显著。说明供体与受体发情同期化程度也是影响胚胎移植的重要因素。

　　4.4胚胎类型与妊娠率及胚胎成活率的关系

　　经卡方检验，移植2C、4C和8C的移植妊娠率和胚胎成活率相比较差异不显著（p>0.05）。

　　4.5胚胎移植羔羊性别比例共产羔羊61只，其中公羊28只，母羊33只。公母比例为1:1.18。经卡方检验，p> 0.05，差异不显著，公母比例与理论值相符。说明胚胎移植操作对所产羊羔的性别无影响。

　　4.6移植单双胚与妊娠、产羔的关系

　　经卡方检验，移植单胚受体妊娠率与移植双胚受体妊娠率相比较差异极显著（p< 0.01）。

　　5讨论

　　5.1超数排卵方面11只供体羊仅有1只羊对垂体促卵泡素FSH极不敏感，可能因为FSH用量相对于这只羊而言过大，抑制了卵泡发育、排卵和发情；也有可能与动物的个体差异有一定关系。

　　5.2胚胎质量方面相对而言，胚胎阶段分布不是很集中，这是否与供体羊对激素的敏感程度不一样而引起的；而且胚胎中退化的和未受精的较多，这是否与供体羊缺乏VE/Se等营养元素有一定的关系，有待进一步研究。

　　5.3供体羊的后期处理11只供体羊采胚4d后，全部注射PG，后全都妊娠；有2只羊术后伤口感染，确因圈舍环境较差导致，经过治疗后业已康复。

　　6结论

　　根据本研究结果的判断，所制订的方案对育成波尔山羊效果较好，供体羊平均获胚数和产羔羊数分别为8.90和5.50只，经济效益明显，而且不影响供体羊以后妊娠，技术上相对比较成熟，可推广应用，但同时在供受体发情同步差、移植胚胎数、移植的部位和方法、受体的术后管理等环节上需要通盘考虑，才能提高ET的成功率，扩大良种羊群，加速品种改良，获得良好的经济效益。

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