| 西藏山羊地方流行性流产病的诊断及防治研究 |
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| 编辑： 吴诗 2011-11-08 | |
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本文报导西藏自治区山羊地方流行性流产病原诊断和防治措施。通过流行病学调查、临床观察、流产胎儿病理解剖、组织培养、镜检、动物试验和间接血凝反应等方法, 确诊本病是由衣原体所引起的山羊传染性流产。并用当地分离的衣原体为种毒, 通过鸡胚和鸡胚细胞传代培养, 取其卵黄囊和细胞培养液制成灭能苗和弱毒苗。从1983年至1989 年, 先后研制出了28批疫苗, 通过安全、效力检验、疫区试用和区域试验结果证明, 该苗安全、有效。 衣原体通常存在于节枝动物及哺乳动物细胞内，对人及动物均有染病性。据报导, 国外主要引起绵羊的流产, 山羊少见, 国内主要引起山羊流产, 绵羊次之。我国各养羊区特别是西藏、甘肃、内蒙、青海等省区由衣原体引起的山羊流产尤为严重, 造成经济损失很大, 如何控制或消灭该病, 尚无有效办法。专家们从患过衣原体病的人和动物可获得免疫力这一现象分析, 预言有可能制成人畜共用的疫苗。但至目前, 国外尚无商品苗生产。为了有效地控制我区山羊流产病, 作者等对该病的病因和防治措施作了研究, 现报道如下。 流行病学调查与诊断 一、流行情况 山羊地方流行性流产病是一种全区性疫病, 流产率一般为20%-30%, 个别生产队高达94.8% , 据1976 年全区家畜疫病调查, 35个县160个公社的不完全统计, 1976年至1978年有207185 只山羊流产。作者对七个县的部分公社、生产队的调查, 1981年至1983年, 怀孕山羊17288 只（次）, 流产4924只（次）, 流产率28.48%。（见表1） , 究其流产原因, 说法不一。一曰清晨出牧饮了冷水之故, 二日进出圈拥挤造成机械性流产, 三曰春乏所为, 四曰近亲繁殖所致。但采取相应措施后并未凑效。 二、临床症状 流产可发生于妊娠的全过程, 但以孕后1~2个月流产者较多, 产前2~3周是流产高峰期。一般流产无前驱征兆。边吃草边流产或清晨出牧时发现流于圈内。个别羊只流产前表现食欲较差或出现腹痛症状, 有的有少量阴道分泌物。新疫群一般流产较早,且多为死胎, 老疫群多为早产甚至怀孕足月时突然被排出, 胎羔的发育健全, 与其孕期相称, 产下时多还存活, 但体质虚弱, 产后1至2天内死亡。胎衣通常同时被排出, 母羊多能耐过流产而存活。 三、流产胎羔的外观与剖检 胎衣病变部分的图象以坏死为特征, 绒毛叶部分或全部坏死, 呈暗红色或土黄色从绒毛叶出发, 有范围不等的绒毛膜大面积混浊、增厚、潮红, 部分表现水肿。在呈现炎症变化的区域, 羊膜和胎羔体表多有灰黄色或黄色蛋花样覆盖物。流产的胎羔表现为皮下水肿和胶样浸润, 尤以脐部、鼠蹊部、鼻梁和脑后最为明显。心、肺常有浆膜下小点出血, 肝肿大, 胃内有蛋清样粘依, 体腔中常有淡红色渗出液。 四、实验诊断 1983年至1989年先后从山南、拉萨市和日喀则所属六个县收集流产胎羔150余只, 逐个解剖, 取其肝脾和部分胃内容物, 作为分离病原和动物试验材料。并将每份病料触片或抹片染色镜查, 筛选出阳性病料57份。从中选择典型病料21份。感染鸡胚、鸡胚细胞和小白鼠等, 纯分病原14株。 （一）染色镜检：病料触片或抹片镜检, 镜下整个背景呈绿色, 少数细胞内可见到大量鲜红色小点, 多为圆形, 也有椭圆形的,有的细胞坏死崩解, 红色小点外溢。个别细胞完全溶解, 只残留模糊的轮廓和成堆的小红点, 这种鲜红色小点, 是衣原体的原生小体, 在绿色背景下显得特别大而突出。 （二）感染鸡胚和鸡胚细胞：取镜检阳性病料, 用Eeglis液(Henks 液也可)作成1:10乳剂, 每毫升乳剂加链霉素1000单位。置冰箱中作用3-4小时,2000转/分离心20分钟,取上液接种。 1. 感染鸡胚:以0.3毫升接种到9 日令鸡胚卵黄囊内, 36 一 2. 感染鸡胚细胞:用10-11日龄鸡胚制作鸡胚细胞, 分装于盛有半边盖玻片的灭菌培养小方瓶中,36℃ 培养20小时左右, 细胞铺满瓶面时始可接毒。接毒时先将培养瓶中的营养液弃去, 再注入病料, 以盖满细胞瓶面为宜。静置10-20分钟, 再加入营养液适量，36℃ 培养。一般5-7天细胞开始脱壁即可收获。并将瓶内半边盖玻片取出染色镜检, 发现有原生小体者, 即将该培养瓶置冰箱冻结保存。 (三)动物试验 取镜检阳性胎儿肝脾, 作成1:5乳剂和细胞培养液感染动物。 1、感染小白鼠：选用36只一月龄小白鼠，18只作滴鼻感染, 每只滴乳剂0.3-0.5毫升，11-22天死亡9只，解剖发现多数有肺炎病征, 扑杀一只, 也有肺炎症状。用自然死亡和扑杀小鼠的肝、脾、肺组织抹片镜检, 多数有原生小体。 另18只作腹腔注射, 每只0.5毫升,8-15天死亡4只, 扑杀3只, 其病变和镜检结果同。未死亡的小鼠, 发育严重受阻,被毛粗乱无光泽, 毛长而稀少, 不长个头, 变成僵鼠。 2、感染小鸡 一月龄小鸡9只, 每只肌注细胞培养液2毫升, 第8天开始出现临床症状, 主要表现为关节炎, 关节肿胀、增温、变形甚至麻痹不能站立, 食欲减退以至废绝。羽毛粗乱、精神沉郁。第10天死亡3只；肝抹片镜检, 均见有原生小体, 其余6只均陆续死亡。 3、感染豚鼠 妊娠豚鼠3只、公鼠1只, 用鸡胚细胞培养液肌注, 各5毫升, 第6和第8天各流产1只, 胎儿甚小未长毛。第30天流产1只, 毛已长全, 已到临产期被排出。公鼠未见临床变化。流产母鼠日后死亡1只, 死胎肝脾抹片见有原生小体。 4、感染山羊1983年在贡嘎县江雄公社四队山羊群（老疫群）中随机抽取9只怀孕母羊, 用三代鸡胚细胞培养液静脉注射5毫升6只、10毫升3只,5 天后陆续出现眼发红, 睑泡肿胀,10天后逐渐恢复正常, 又过1月后全部正产。可是其余72只怀孕山羊, 却流产了61只。1988年5月在本所内又感染山羊10只, 每只静脉注射细胞培养液10毫升, 5天后陆续出现眼发红、睑泡肿胀, 有两只最严重,10天后均逐渐恢复正常。 5.乳剂1毫升肌注成年鸽子5只,1-1.5毫升细胞液静脉注射家兔6只, 均未出现临床症状。 （四）诊断：根据流行病学调查、流产胎儿病变、镜检结果和动物感染试验等可确诊为：我区山羊地方流行性流产病系衣原休所致。 1、从流行病学调查看, 我区山羊流产病具有群发性、普遍性和传感性, 并非饲养管理所致, 也排除了其它疾病引起流产的可能性。原区畜牧队也作过实验室的诊断, 虽未确定病原, 但排出了细菌, 病毒的感染。鹦鹉热和钩端螺旋休补反均为阴性, 布病血检阳性率很低。 2、从动物实验结果看, 可致死鸡胚、小白鼠,可致小鸡关节炎、豚鼠流产, 可引起山羊角膜、结膜炎等。 3、无论从流产胎羔肝脾抹片或人工感染死亡的鸡胚卵囊膜、小鼠肺组织、豚鼠流产胎儿肝组织抹片, 均可发现细胞浆内有大量成堆成串的衣原体的原生小体存在, 这是最具有特征性的。 4、人工感染后恢复的山羊血清间接血疑试验结果, 滴度均达到1：64（强阳性）。 疫苗研制与试用 一、毒种 用从自然流产胎羔的肝、脾、胃内容物中纯分离的衣原体作毒种。 二、制造方法 一、灭能苗 种毒接种鸡胚卵黄囊和鸡胚细胞传代繁殖, 取感染致死的鸡胚卵黄囊捣碎研细, 用2.5%奶粉生理盐水作1：10稀释, 鸡胚细胞作1：5稀释, 每毫升加链霉素1000单位, 用铜网或四层纱布过概, 按0.2%加入甲醛和1/2.5万硫柳汞, 密封瓶口杀菌24小时,然后分装, 贴上标签, 即成灭能苗。置3 二、弱毒苗 将五代以上的鸡胚细胞培养液, 用2.5%奶粉磷酸缓冲液5倍稀释,每毫升加链霉素1000单位和1/2.5万硫柳汞防腐, 分装疫苗瓶, 贴好标签, 置 三、安全检验每批苗分别肌注健康家兔2-3只, 每只5毫升, 肌注健康山羊10-20只, 每只10毫升, 观察20天, 注射局部无红肿化脓现象。 四、效力检验 采用间接血凝法, 对1988和1989年研制16批苗作了效检, 用家兔和山羊同时进行。判定标准, 国家在畜禽疫病普查中规定, 用间接血凝法检查山羊衣原体病时, 以1：16出现“++” 以上者判为阳性。众所周知, 自然感染的血清滴度要比疫苗免疫出现的血清滴度高得多, 因此我们确定用间接血凝法检验衣原体苗的效力时, 以1：8“++” 以上者判为阳性。 （一）家兔效检: 选择体重3-5斤间接血凝衣原体阴性的健康家兔, 每批疫苗肌注免疫家兔2~ 3 只,2 0 ~ 30 天采血作间接血凝试验结果,16 批苗合格的有15批, 保获率15/ 16。 (二) 山羊效检:选择1 ~ 2 岁间接血凝检查衣原体阴性的健康山羊, 每批苗肌注免疫山羊2 ~ 3 只,20 ~ 30 天后采血作间接血凝检验结果,16 批苗全部合格。 五、皮苗试用和区域试验情况: 1983 年研制的4 批灭能苗, 分送山南地区乃东县、贡嘎县和拉萨市麻将区( 均为老疫区) 作现地免疫试用观察。1984年春, 产羔结束后作了调查统计。乃东县六个公社,1983年山羊平均流产率为23.40 % ,1984年平均流产率降至4 .18 % ,贡嘎县江雄公社1983 年流产率为56.4% ,1984年降到0.61 % , 麻将区两个生产队的统计,1983年流产率为5 1.91 % ,1984年降至5.31 % 。当地群众和兽防人员的反应, 注射后山羊无不良反应, 流产大有减少。 1988年研制的10 批苗, 送山南和日喀则作区域试验, 山南的穷结、乃东、贡嘎三县共免疫注射生产母山羊39~56只, 产羔结束后统计, 流产20只, 流产率仅为0 .5 % 。日喀则市在下鲁等4 个乡共免疫注射生产母山羊2740只, 产羔后统计流产率降至5.51 % 。而该4 乡在1甘8 7年和19 88年的流产率分别为20.01 % 和24.2% 。 六、度苗免疫期: 未作正式测定, 但从198 8年疫苗效检时免疫的羊中找到四批苗的6只免疫畜, 经测定免疫血清滴度基本保持1:16“+ +” ,可初步说明该苗的免疫期至少可以达到一年。 防治措施 山羊地方流行性流产病是由衣原体引起的一种传染病。衣原体感染动物时, 除少数可直接感染外, 大部分则需节肢动物做传播媒介, 如蚤、虱、蟀、瞒等。据此, 应采取如下防治措施。
一、棚圈定期消毒: 用5 % 石炭酸、来苏儿,0.2甲醛等, 可杀灭病原, 减少感染机会。 二、消灭媒介物蚤、兔、蟀等。用喷撒或药浴等办法杀灭棚圈及体外寄生虫。 三、流产胎儿、胎盘、羊水等含有大级病球体, 是主要传染源, 所以产羔季节是本病传播的高峰期, 因此, 应将流产胎儿及其附属物深埋, 产圈要及时严格消毒。 四、免疫接种:高密度注射疫苗是预防该病的最好办法, 连续免疫三、五年, 可以控制该病。 五、洽疗:衣原体对抗菌素类药物很敏感, 用青霉素、庆大霉素、磺胺类药物治疗均有效。 相关信息: |
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