国家肉羊产业技术体系 - 不同品种肉羊胚胎移植效率的研究

不同品种肉羊胚胎移植效率的研究

编辑：吴诗 2012-01-07

【Author】 XUE Lian¹,REN Jun-guang²,XUE Xiao-xian1,CHAN Hong-wu³,YANG Jin-min³,BAO Shor-gan1(1.Key Laboratory of Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology of the Ministry of Education,Inner Mongolia University,Huhhot 010021,China;2.Inner Mongolia Sinyon Genetics Co.,Ltd.;3.Inner Mongolia Sinau Genetics Co.,Ltd.)

【机构】内蒙古大学教育部哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室；内蒙古赛阳牧业有限公司；内蒙古赛澳牧业科技发展有限公司；

【摘要】以无角多赛特、萨福克、德克赛尔、东福利生纯种肉用绵羊为供体,以内蒙古小尾寒羊为受体,利用辅助生殖技术对纯种群体进行扩繁,并对不同品种肉羊的超排及胚胎移植效果进行了比较。结果显示,无角多赛特和萨福克的平均超排胚胎数明显高于德克赛尔和东福利生(P<0.05);将2523枚A级囊胚进行移植,总产羔率为51.32%,以无角多赛特产羔率明显优于其他品种肉羊(P<0.05);手术和腹腔镜移植技术对引进的纯种绵羊产羔率没有影响,但腹腔镜移植技术对受体造成的创口小,操作快捷。

【Abstract】 The assisted reproductive technology(ART) was used on imported four breeds of mutton sheep for multi-ovulation and embryo transfer(MOET).The results of MOET were evaluated with the number of embryos flushed and lambs delivered.The effect of different embryo transfer technologies was also evaluated with surgical method and laparoscopic one.The results showed that there were significant differences among breeds of donor in multi-ovulation,the PollDorset and the Suffolk were better.For embryo transfer,the PollDorset was better than that of the other breeds.The total lambing rate was 51.32%.

【关键词】纯种肉用绵羊；胚胎移植技术；超数排卵；产羔率；腹腔镜技术；

【Key words】 mutton sheep； embryo transfer； multi-ovulation； rate of lambing； laparoscope；

【基金】内蒙古自治区科技项目“肉羊良种繁育及标准化饲喂技术推广”(2006z2002)

为配合国家退耕还林, 草原禁牧政策,肉羊产业逐渐从粗放的放牧形式向集约化的舍饲圈养形式转变。与放牧不同, 舍饲圈养模式对羊的品种的要求非常高 (那顺德力格尔, 赵宏岩, 2005)。为此, 各地引进了多种高品质且适合舍饲繁育的肉羊品种, 主要有无角多赛特、萨福克、杜波、德克赛尔以及欧洲的德国美利奴等, 它们具有生长迅速、繁殖率高、肉质鲜美、口感好等特点。为了改良我国肉用绵羊品种,提高羊肉品质及加速引进良种肉羊的繁殖速度,各地还利用胚胎移植技术加速优良品种选育, 大大缩短了肉羊繁殖周期, 并在一定程度上降低了肉羊的生产成本。该项技术的应用也为我国实现肉羊产业的现代化奠定了技术基础。

胚胎移植技术是现代家畜繁殖生物工程技术中较为成熟的技术之一, 被广泛应用于优质奶牛和肉牛的繁殖过程中(特日格勒等, 2005 )。由于羊的解剖结构限制, 在牛上采用的非手术冲卵法及胚胎移植技术难以在羊的种群繁殖生产中得到广泛应用 (李信涛, 2005)。

近年来腹腔镜技术 ( laparo scope)普及应用和改良的羊胚胎移植技术体系 ( Integ ra ted Em bryo Transfer Syste m )的出现,使羊辅助生殖技术的应用得到了极大的发展。该技术将腹腔镜技术和牛胚胎移植技术中的冲卵技术整合到羊的胚胎移植技术中, 取得了前所未有的效果 (祝远魁, 2005) ,并进入实际应用阶段。探讨其在绵羊的纯种繁育、快速扩群及提高种畜的应用,对于提高肉用绵羊品质, 加快我国绵羊优良品种的选育具有重要意义。由于条件所限, 过去对胚胎移植的研究多只集中在某一肉羊品种(张思合, 2005), 而且研究范围也局限在胚胎移植技术的少数环节上 (姚忠良, 张良,2005), 难以进行全面的评价和分析。本研究以内蒙古赛澳牧业科技发展有限公司种羊繁育基地为依托,以澳大利亚引进的 4种纯种肉羊作为供体, 以本地小尾寒羊为受体, 进行了大规模的纯种扩繁生产性试验, 全面、系统地研究了利用现代辅助生殖技术对肉羊进行快速扩繁过程中的影响因素,在育种、肉羊产业化应用等方面都具有较高的价值。

1 材料与方法

1 . 1 材料

1 . 1 . 1 实验动物供体羊选用 14~ 16月龄的澳大利亚纯种胚胎移植后的第 1代纯种肉羊品种, 包括: 无角多赛特 ( Po ll Do r set)、萨福克 ( Su ffo l k)、德克赛尔 ( Texe l)、东福利生 ( East Friesian); 受体羊为当地小尾寒羊。

1 . 1 . 2 实验器材羊手术架、手术刀器械 (国产 )、腹腔镜( AutoBr ite TM, I ll um i nato r II )、硅胶气囊导尿管 ( S ilicone Fo l eyCatheter , Tyco /H ea lt hcare Group U. S . )、羊子宫角冲卵专用导管 ( I . V. C at hete r18G ! 2 、 DD Ang i ocathTM )、羊子宫角胚胎移植专用细管 ( C ap ill ary P i pettes , Unopette )等。

1 . 1 . 3 试验药品羊用同期发情阴道栓 ( C I DR G, 20枚 /包新西兰 )、促卵泡素 ( FSH, 100 U /支,宁波激素生物制品有限公司 )、促黄体素 ( LH, 200 U /支, 宁波激素生物制品有限公司 )、胚胎培养保持液 ( Co m plete Em care holdi ng med i um 100m l/瓶,新西兰 )、供体羊冲卵用营养液 ( Comp l e te Em care fl ushso l uti on , 1000 m l/袋,新西兰 )。

1 . 2 方法

1 . 2 . 1 超数排卵所有品种的供体均采用阴道栓诱导同期发情。在放栓第 11 d撤栓, 同时注射 FSH。本研究第 1次超排于 2007年 10月 1日开始, 注射总剂量为 138 U, 分 6次递减注射 ( 28、 28、23、23、18、 18 U ), 每天上午、下午各注射 1次。在第 5次、第 6次注射之间注射 1次 LH ( 80 ~ 130U )。

1 . 2 . 2 人工输精超排处理后发情当日, 将使用假阴道法采集的同种公羊精液稀释 4倍, 使用腹腔内子宫角输精技术, 将 0 . 25 m l稀释精液输入供体子宫角前端。

1 . 2 . 3 冲胚及胚胎质量认定在腹腔镜输精后第 7 d进行冲胚。手术前, 清洗供体羊手术部位并剃除腹部细毛, 实施麻醉, 腹中线一侧手术切口,暴露子宫角及卵巢,在确认黄体出现之后使用子宫冲胚方法进行冲胚。在体视镜下对冲出的囊胚进行分级, 根据囊胚形态将胚胎分为 A、 B、C 3个等级。外形规则、内细胞团致密的为 A 级,用于鲜胚移植;外形规则、内细胞团不十分致密的视为 B级, 进行冷冻。

1 . 2 . 4 胚胎移植分别采用手术和腹腔镜移植两种方法。用自制输卵器将 7日龄囊胚移植到经同期发情处理后的受体的子宫角前 1 /3处, 移植后注射 1 m l黄体酮。

1 . 2 . 5 妊娠观察胚胎移植后对受体定期试情, 3个情期后未返情的受体确认为妊娠。

1 . 2 . 6 数据分析每组实验均重复 3次以上。试验结果用卡方检验分析。

2 结果

2 . 1 不同品种供体超数排卵效果的比较本试验选用的 4个国外引进的纯种肉羊品种供体经超排处理后所得胚胎总数、胚胎质量分级、平均胚胎枚数见表1。可见无角多赛特和福克绵羊的超排效果最好 (平均6 . 2 、7 . 6枚 /只 ),超排后所得胚胎数与其他两种肉羊相比存在显著差异 (P < 0 . 05)。

2 . 2 不同品种供体胚胎移植后产羔率的比较将部分超排出的 A 级囊胚移植入同期发情的小尾寒羊子宫角, 观察其胚胎在小尾寒羊受体中的发育 (表 2)。显示无角多赛特胚胎对于小尾寒羊受体有较强的适应性。

2 . 3 不同移植方法对产羔率的影响

比较手术和腹腔镜移植方法的产羔率 (表 3), 显示两种移植方法对产羔率没有影响 ( P > 0 .05 )。但是, 腹腔镜移植对受体动物造成的创伤小,操作快捷, 适合批量移植等特点, 更适合在舍饲条件下大量、快速的扩繁种群。

3 讨论

近年来,国内在使用辅助生殖技术对肉羊种群进行扩繁的应用方面有了很大的普及。但由于各地采用的供体和受体的品种、年龄、体况各异, 操作技术及试验条件不同, 所以移植结果有所不同 (王锐等, 2005)。本研究一次选择较多供体品种进行优质肉用种绵羊扩繁的生产性试验, 所选供体年龄集中于 14~ 16月龄, 且均为头一年经胚胎移植产下的育成羊,因此可以对不同品种的胚胎移植羔羊的生殖潜力做一个平行的比较。

据报道,相同 FSH 剂量下, 供体羊的超排效果与羊的品种有关,高繁殖性能的羊种超排潜力较大 (亓美玉, 李武,2003)。本试验各品种间的个体平均获胚数存在显著差异,无角多赛特和萨福克羊的超排效果明显好于德克赛尔和东福利生羊。证实超排成功率较高的品种, 只均黄体数较多,相应的受体产羔率也较高。

本次试验将体内发育 7日的囊胚移入同期发情的小尾寒羊受体子宫角的 1 /3处,胚胎移植效果较好。其中无角多赛特的移植后产羔率接近 62 %, 显著高于其它品种 ( P <0[1]05)。无角多赛特是优秀的肉羊品种, 母羊为非季节性繁殖,其产羔率为 140 % ~ 160% (李武,季令芝, 2004)。推测该种绵羊在做胚胎移植时,比德克赛尔及东福利生羊更适于采用本地小尾寒羊做受体,即无角多赛特绵羊囊胚对小尾寒羊受体的适应性可能更强,而德克赛尔绵羊无论超排效果还是移植后产羔率都不及其它 3种供体。

研究证明,腹腔镜技术是一项非常便捷高效的胚胎移植技术,不但广泛应用于胚胎移植, 采用腹腔内子宫角输精技术可有效利用精液, 且对子宫角的创伤较小, 提高了受精率(姚玉昌,李武, 2006)。本研究使用不同移植方法对胚胎移植效果 (产羔率 )作了评估, 虽然在最终移植效果上和熟练的手术移植没有显著差异, 但从二者的时间差别 (腹腔镜移植平均需要 45 s , 熟练手术移植需要 5 m i n)和对供体羊的创伤程度的差异来分析,应普及使用腹腔镜技术。

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